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在進(jìn)行HPLC分析之前,如何對(duì)生物樣品進(jìn)行脫蛋白處理?

? ? ? ? 恒譜生建議各位色譜操作者在進(jìn)行液相色譜分析前,關(guān)注樣品過(guò)濾的重要性,這是為什么呢?主要是為防止蛋白質(zhì)等雜質(zhì)沉積在色譜柱上,上柱前需對(duì)生物樣品進(jìn)行去蛋白的預(yù)處理。這樣可以延長(zhǎng)色譜柱壽命并減少維護(hù)成本,從而有助于提高實(shí)驗(yàn)室通量。

? ? ? ? 脫蛋白對(duì)于分析生物液體(例如血漿,血清,尿液和腦脊髓液)中的抗生素,殘留農(nóng)藥含量等也起著非常重要的影響。并且如果不將沉淀的蛋白質(zhì)從樣品中去除,會(huì)導(dǎo)致色譜柱性能下降,最終影響色譜分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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? ? ? ? 生物樣品中去除蛋白質(zhì)的處理方法有3種:

? ? ? ? 利用蛋白質(zhì)脫水沉淀。采用有機(jī)溶劑如乙腈、甲醇等,或中性鹽如硫酸銨、硫酸鈉等使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。采用乙腈時(shí),產(chǎn)生的沉淀易分離。當(dāng)用1~3倍體積的有機(jī)溶劑時(shí),可使90%以上的蛋白質(zhì)沉淀。將血漿樣品和乙腈混合、離心后,約95%的蛋白質(zhì)會(huì)沉淀。非極性蛋白質(zhì)(例如白蛋白)則保留在液相中。如果使用保護(hù)柱除去剩余5%的蛋白質(zhì),則可以直接注射上清液。長(zhǎng)期使用時(shí),需要將保護(hù)柱進(jìn)行更換或倒置并沖洗掉,以防止蛋白質(zhì)進(jìn)入主柱。

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? ? ? ? 恒譜生建議在色譜柱前加保護(hù)柱,可以對(duì)樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾,能夠更長(zhǎng)時(shí)間的維護(hù)色譜柱柱效并有效保護(hù)色譜柱,延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。恒譜生色譜保護(hù)柱經(jīng)設(shè)計(jì)優(yōu)化,在各種分離條件下對(duì)色譜的影響都極低。其低死體積設(shè)計(jì)可大幅降低峰擴(kuò)散和峰拖尾,從而保持分離度和分析效率。耐壓上限可達(dá)15,000 psi,經(jīng)濟(jì)高效地保護(hù)了HPLC、UHPLC色譜柱和制備柱產(chǎn)品,發(fā)揮良好性能。

? ? ? ? 我們有多種型號(hào)的保護(hù)柱,有直連保護(hù)柱、旋轉(zhuǎn)式保護(hù)柱,有UPLC、分析保護(hù)柱和半制備、制備保護(hù)柱,它們結(jié)合了不銹鋼的強(qiáng)度和PEEK 預(yù)填柱芯的方便和高效。更好的滿足客戶的多種需求。

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? ? ? ? 利用蛋白質(zhì)形成不溶性鹽沉淀。常用的為酸性沉淀劑,如三氯醋酸、高氯酸等,或用重金屬離子等使蛋白質(zhì)沉淀。 用三氯乙酸酸化,離心并用氫氧化鈉中和可除去99%的蛋白質(zhì)。也可以使用全氯乙酸。

? ? ? ? 其他方法。加熱使蛋白質(zhì)沉淀,適用于樣品對(duì)熱穩(wěn)定者??蓪悠分梅兴≈校沟鞍踪|(zhì)直接變性生成沉淀?;虿捎贸瑸V和透析方法,除去體液樣品中的蛋白質(zhì),在處理過(guò)程中樣品內(nèi)蛋白質(zhì)并未變性,結(jié)合的待測(cè)成分未能被解脫出來(lái)而不能檢出,此法可測(cè)得血清或血漿中游離的待測(cè)成分的濃度。但費(fèi)時(shí),在分析大量的樣品時(shí),受到一定的限制。

新聞底欄


發(fā)布于: 2021-05-14
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